1．凡进入手术室的工作人员必须更换手术室的衣、帽、口罩、裤、鞋子必须盖住头发，方准入内。
2．除参加手术的有关人员外，其他人员不得入内。参观手术需经医教科、护理部批准，其人数不能超过手术间规定之数字。
环境要求
1．手术间应保持清洁，每次术后一切用物均应用消毒液湿式擦抹，地面、墙角需清洁干交，并以消毒液拖净。
2．每日各手术间彻底打扫一次。
3．吸引瓶、污物桶每次用后，洗刷干净，并以消毒液浸泡后方可使用。
4．洗涤间须保持清洁和下水道通畅，洗手护士勿将刀、针、线圈丢入水池，以防堵塞。
5．洗手间每晚与次晨须各拖地一次，洗手完毕再清洁打扫，及时冲洗水池积垢每周擦拭以保持水池洁白通畅。
6．更衣室清洁工作，地面，便池要求洁白无臭味，每日拖地二次，每周总打扫一次。
7．保持洗澡间整洁，防止毛发等物堵塞下水道，非本室人员及非当日手术人员，不得在该洗澡间洗澡。
8．办公室每日须擦拭桌面并清扫拖地，使用后随时保持清洁整齐，每月大扫除一次。
9．手术室在严格划分无菌，有菌区域后，手术按无菌与感染分室，因诊断不明或其它原因在无菌手术间施行有菌手术后，应进行严格严密的清洁和消毒。
消毒隔离制度
1．无菌手术和污染手术应分室进行，如必须在同一手术间进行，应先做无菌手术，后做污染手术。
2．手术前后以0.1%有效氧消毒液或0.5 %过氧乙酸擦拭手术床、桌、台、凳、用具、门窗等，并用思康消毒液拖擦地面，室内经常保持医疗器械、物品清洁整齐，每周大搞一次卫生。术前30-60分钟之前启动导流，做污染手术后按常规要求及时消毒处理。
3．无菌罐、无菌镊（钳）、无菌盒采用灭菌后干保存一用一灭菌。各种治疗包、手术包、敷料包经高压蒸汽灭菌后，有效期为两周。
4．用过的手术器械、手套清洗后分别置于超声波清洗机清洗，然后将器械放入烤箱烤干，涂油备用，手套晾干备用。用过的布类、敷料送洗衣房清洗煮沸消毒30分钟。乙型肝表面抗原阳性患者和绿脓杆菌感染患者用过的器械，置于500mg/L含氯消毒液中浸泡30分钟，取出清洗烤干，一次性敷料用后送大地维康公司焚烧。对用过的手术间，以0.5%过氧乙酸擦试手术床、麻醉桌、凳、器械台、门、窗、用具、地面以思康消毒液拖擦消毒。
5．破伤风、气性坏疽等特异性感染手术患者用过的器械、浸泡、冲洗后经高压蒸汽灭菌再洗净、烘干、涂油备用。用过的布类送高压灭菌后再送洗衣房清洗煮沸消毒30分钟。用过的敷料送大地维康公司焚烧。不能耐高温的精密仪器，用低温灭菌密闭。
6．手术包用化学指示剂检测灭菌效果，包内放置二张指示卡，每月做一次生物指示剂检测（即用嗜热脂肪杆菌芽胞检测）。
7．手术间每月做空气细菌培养一次，按规定和手术室等级放置平皿。
8．手术室应设置消毒物品贮藏间，各种无菌包经高压灭菌有效期为7天，霉季为3天。
9．无菌包内必须放有化学指示卡和3M胶带。
10．已打开的无菌包，必须用无菌单严密遮盖，不得超过4小时。
11．高压灭菌物品、手术间空气、手术者手、医用器材（熏蒸、浸泡），消毒液、净化水、操作台，每月细菌检测培养一次。
12．各手术间周期清洁消毒规定。
13．手术者戴好手套后，不得任意行走及离开手术室。
14．任何人发现或被指出违反无菌操作时，必须立即纠正，术者脐平面以下区域均视为有菌区，如器械等无菌物品掉至平面以下，必须重新灭菌后才能使用。
15．器械护士不可从术者身后传递器械，需要时可在术者臂下传递，但不能低于台面。
16．已取出的无菌物品，虽然未污染，但也不能放回原容器中，必须重新灭菌后再用。
17．手套破损，立即更换，凡疑有物品污染，必须重新灭菌后再用。
18．术中被污染的器械，如切开消化道的剪、刀，均须另放于弯盆内，不能重新使用。